外源性DNA残留量测定

应用领域:哺乳动物细胞生产治疗性疫苗和治疗性生物制品。

常见生物制品:单克隆抗体、重组蛋白质制品、疫苗。

DNA残留检测重要性:细胞培养产生的生物制品含有特定的杂质,会包含宿主细胞蛋白和DNA,对人体可能产生致癌性或感染性等危害。

检测方法
  • 定量PCR法

    PCR反应过程中可通过荧光标记的特异性探针或荧光染料掺入而检测PCR产物量,通过连续监测反应体系中荧光数值的变化,可即时反应特异性扩增产物量的变化。在反应过程中所释放的荧光强度达到预设的阙值时,体系的PCR循环数(Ct值)与该体系所含的起始DNA模板量的对数值呈线性关系。采用已知浓度的DNA标准品,依据以上关系,构建标准曲线,对特定模板进行定量分析,测定供试品中外源DNA残留量。
  • 荧光染色法

    应用双链DNA荧光染料与双链DNA特异结合形成复合物,在波长480nm激发下产生超强荧光信号,可用荧光酶标仪在波长520nm处进行检测,在一定的DNA浓度范围内以及在该荧光染料过量的情况下,荧光强度与DNA浓度成正比,根据供试品的荧光强度,计算供试品中的DNA残留量。

蛋白质残留量测定

总蛋白含量测定、牛血清白蛋白残留量测定、大肠埃希菌菌体蛋白质残留量测定、假单胞菌菌体蛋白质残留量测定、酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定。

应用领域:生物制药研发过程中的质量控制。宿主细胞蛋白(Host Cell Protein, HCP)通常与药物产品共纯化,是药物产品在制造过程中经常产生的杂质。

蛋白残留测定重要性:HCP通常是源自宿主生物体的低水平内源性蛋白质,难以纯化或检测,成品中的HCP会降低药物的疗效或引起不良的免疫原性反应,影响治疗活性。

检测方法
  • 多分析酶联免疫吸附试验(ELISA)

    多分析酶联免疫吸附试验(ELISA)为应用较为广泛的残留HCP检测方法,目前已成为检测残留HCP的公认方法。

抗生素残留量检查法(培养法)

本法依据在琼脂培养基内抗生素对微生物的抑制作用,比较对照品与供试品对接种的试验菌产生的抑菌圈的大小,检查供试品中氨苄西林或四环素含量。

检测方法
  • 培养法

    比较对照品与供试品对接种的试验菌产生的抑菌圈大小,检查供试品中氨苄西林或四环素残留量。
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